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上海遠慕講述:人ELISA試劑盒解決辦法
點擊次數:1356 更新時間:2016-08-23

    上海遠慕講述:人ELISA試劑盒解決辦法

    血清是zui常用的人ELISA試劑盒標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種,本文主要為大家介紹內源性物質:

    內源性物質:有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。

    (1)類風濕因子

    人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與人ELISA試劑盒系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽性。

    解決該情況的辦法是:

    ①用F(ab)2替代完整的IgG;

    ②標本用聯有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。

    (2)補體ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程中,人ELISA試劑盒抗體分子發生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q可以將二者連接起來,人ELISA試劑盒從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。

    (3)嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時無效。

    (4)嗜靶抗原的自身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結合形成復合物,在人ELISA試劑盒方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現,測定前需用理化方法將其解離后再測定。

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